Pagkakaiba ng Key - Northern vs Southern vs Western Blotting
 

Ang pagtuklas ng mga tukoy na pagkakasunud-sunod ng DNA, RNA, at mga protina ay mahalaga para sa iba't ibang mga uri ng pag-aaral sa Molecular biology. Ang gel electrophoresis ay isang pamamaraan na naghihiwalay sa DNA, RNA, at mga protina ayon sa kanilang laki. Mula sa mga profile ng gel, partikular ang pagkakasunud-sunod ng DNA, pagkakasunud-sunod ng RNA, o protina na napansin ng mga espesyal na diskarte na tinatawag na blotting at hybridization na may mga may label na probe . Mayroong tatlong magkakaibang uri ng pamamaraang pag-blotting katulad ng timog, hilaga at kanluranin. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng hilagang timog at kanlurang pag-blotting ay nakasalalay sa uri ng molekula na nakita nito mula sa isang sample. Ang southern blotting ay isang pamamaraan na nakakakita ng isang tukoy na pagkakasunud-sunod ng DNA mula sa isang sample ng DNA. Ang Northern blotting ay isang pamamaraan na nakakakita ng isang tukoy na pagkakasunud-sunod ng RNA mula sa isang sample na RNA. Ang Western blotting ay isang pamamaraan na nakakakita ng isang tukoy na protina mula sa isang sample ng protina.

NILALAMAN
1. Pangkalahatang-ideya at Pangunahing Pagkakaiba
2. Ano ang Southern Blotting
3. Ano ang Northern Blotting
4. Ano ang Western Blotting
5. Magkatulad na Paghahambing - Hilagang kumpara sa Timog kumpara sa Western Blotting
6. Buod

Ano ang Southern Blotting?

Ang diskarte sa southern blotting ay binuo ng EM Southern noong 1975 para sa pagkilala sa isang tukoy na pagkakasunud-sunod ng DNA mula sa isang sample ng DNA. Ito ang unang diskarte sa pag-blotting na ipinakilala sa molekular biology. Pinagana nito ang pagtuklas ng mga tukoy na gen mula sa DNA, mga tukoy na fragment mula sa DNA, atbp. Maraming mga hakbang na kasangkot sa southern blotting technique. Ang mga ito ay ang mga sumusunod.

1. Ang DNA ay ihiwalay mula sa sample at natutunaw na may restriction endonucleases .
2. Ang natutunaw na sample ay pinaghiwalay ng Agarose gel electrophoresis.
3. Ang mga fragment ng DNA sa gel ay itinampok sa iisang mga hibla sa pamamagitan ng paggamit ng isang solusyon sa alkalina.
4. Ang solong napadpad na DNA ay inililipat sa isang nitrocellulose filter membrane sa pamamagitan ng paglilipat ng capillary.
5. Ang nailipat na DNA ay naayos nang permanente sa lamad.
6. Ang nakapirming DNA sa lamad ay hybridized na may mga may label na probe.
7. Ang walang pugong DNA ay hugasan mula sa lamad sa pamamagitan ng paghuhugas.
8. Ang X-ray film ay nakalantad sa lamad at isang autoradiograp ang inihanda.

Inilapat ang southern blotting para sa iba't ibang aspeto ng molekular biology. Kapaki-pakinabang ito sa pagmamapa ng RFLP , pag-aaral ng forensic, DNA methylation sa expression ng gen , pagtuklas ng mga mutated genes sa mga genetiko na karamdaman, pag-fingerprint ng DNA, atbp.

Larawan 01: Diskarte sa Timog Blotting

Ano ang Northern Blotting?

Ang Northern blotting ay isang pamamaraan na idinisenyo upang makita ang isang tukoy na pagkakasunud-sunod ng RNA o pagkakasunud-sunod ng mRNA mula sa isang sample upang pag-aralan ang pagpapahayag ng gene. Ang pamamaraang ito ay binuo ni Alwine, Kemp, at Stark noong 1979. Ito ay naiiba mula sa sourthern at mga diskarte sa pag-blotting ng kanluranin dahil sa maraming mga hakbang. Gayunpaman, ang pamamaraan na ito ay isinasagawa din sa pamamagitan ng gel electrophoresis, blotting, at hybridization na may tiyak na may label na mga probe at detection. Ang pamamaraan ng Northern blotting ay ginaganap bilang mga sumusunod.

1. Ang RNA ay nakuha mula sa sample at pinaghiwalay ng gel electrophoresis.
2. Ang RNA ay inililipat mula sa gel papunta sa isang blotting membrane at naayos.
3. Ang lamad ay ginagamot ng isang may label na probe na inihanda mula sa cDNA o RNA (ang pagsisiyasat ay pantulong sa isang tukoy na pagkakasunud-sunod sa sample).
4. Ang probe ay napapalooban ng lamad upang magbigkis sa isang tukoy na pagkakasunud-sunod.
5. Ang mga walang bisig na probe ay hinugasan.
6. Ang mga hybridized fragment ay napansin ng isang autoradiograph.

Ang Northern blotting ay isang mahalagang tool sa pagtuklas at dami ng hybridized mRNA, pag-aaral ng pagkasira ng RNA, pagsusuri ng kalahating buhay na RNA, pagtuklas ng splicing ng RNA, pag-aaral ng ekspresyon ng gene, atbp.

Larawan 02: Northern Blotting

Ano ang Western Blotting?

Ang Western blotting ay isang paraan ng pagtuklas ng isang tukoy na protina mula sa isang pinaghalong protina sa pamamagitan ng paggamit ng may label na antibody . Samakatuwid, ang western blot ay kilala rin bilang isang immunoblot . Ang pamamaraan na ito ay ipinakilala ng Towbin et al noong 1979 at ito ay regular na ginagawa sa mga lab para sa pagtatasa ng protina. Ang mga hakbang ay ang mga sumusunod.

1. Ang mga protina ay nakuha mula sa sample
2. Ang mga protina ay pinaghihiwalay ng kanilang sukat gamit ang polyacrylamide gel electrophoresis
3. Ang mga magkakahiwalay na molekula ay inililipat sa isang lamad na PVDF o nitrocellulose membrane ng electroporation
4. Ang lamad ay hinarangan para sa hindi tiyak na pagbubuklod ng mga antibodies
5. Ang mga inilipat na protina ay nakasalalay sa pangunahing antibody (enzyme na may label na mga antibodies).
6. Ang lamad ay hugasan upang alisin ang hindi partikular na nakagapos na pangunahing mga antibodies
7. Ang mga nakagapos na mga antibodies ay napansin sa pamamagitan ng pagdaragdag ng isang substrate at pagtuklas ng nabuong kulay na namuo

Ang Western blotting ay kapaki-pakinabang sa pagtuklas ng mga anti-HIV antibodies sa isang sample ng serum ng tao. Ang Western blot ay maaari ding gamitin bilang isang kumpirmasyon na pagsubok para sa impeksyon sa Hepatitis B at tiyak na pagsusuri para sa sakit na baliw.

Larawan 03: Western Blotting

Ano ang pagkakaiba sa pagitan ng Northern Southern at Western Blotting?

Buod - Northern vs Southern vs Western Blotting

Ang blotting ay isang espesyal na pamamaraan na binuo para sa pagkilala ng tukoy na DNA, RNA o protina mula sa mga sample. Mayroong tatlong magkakahiwalay na mga pamamaraan ng pag-blotting, katulad ng hilaga, timog at kanluranin, upang makita ang isang tukoy na uri ng molekula. Ang diskarte sa Northern blotting ay dinisenyo upang makita ang isang tukoy na pagkakasunud-sunod ng RNA mula sa isang halo ng RNA. Ang diskarte sa southern blotting ay nagbibigay-daan sa pagtuklas ng isang tukoy na pagkakasunud-sunod ng DNA mula sa isang sample ng DNA at ang diskarte sa western blotting ay binuo upang makilala ang isang tukoy na protina mula sa isang pinaghalong protina.

Mga Sanggunian
1. Gibbons, Janay. "Western Blot: Pangkalahatang-ideya ng Paglipat ng Protina." North American Journal ng Mga Agham Medikal. Mga Medications Publications & Media Pvt Ltd, Marso 2014. Web. 27 Marso 2017
2. Brown, T. "Southern blotting." Mga kasalukuyang protokol sa immunology. US National Library of Medicine, Mayo 2001. Web. 27 Marso 2017
3. Siya, Shan L. "Northern blot." Mga pamamaraan sa enzymology. US National Library of Medicine, 2013. Web. 27 Marso 2017

Kagandahang-loob ng Larawan:
1. "Northern Blot Scheme" Ni RNA405 - Sariling gawain (Public Domain) sa pamamagitan ng Wikimedia Wikimedia
2. "Western blot 114A" Ni Amanthabagdon - Sariling gawain (Public Domain) sa pamamagitan ng Commons Wikimedia

Mga nauugnay na post:

Pagkakaiba sa Pagitan ng Elisa at Western Blot Pagkakaiba sa Pagitan ng Affinity at Avidity Pagkakaiba sa Pagitan ng Genetic Code at Codon Pagkakaiba sa Pagitan ng Transfection at Transduction Pagkakaiba sa Pagitan ng Transient at Stable Transfection